蛋白泛素化在維持細胞穩定性和調控包括細胞凋亡、細胞周期等多種生物學過程中起著至關重要的作用，并且與多種腫瘤的產生和發展密切相關。蛋白泛素化過程由E1泛素激活酶、E2泛素連接酶與E3泛素連接酶這三種酶依次催化進行，其中E3泛素連接酶決定了泛素化底物的特異性，而且可以作為腫瘤靶向治療的有效靶點。然而，現階段的研究工作并未深入探討E3泛素連接酶的功能。因此闡明一些關鍵蛋白質的泛素化調控機制可以更好的解釋蛋白質功能、細胞信號調控、疾病發病機理等。

近期，發表于Nature Immunology雜志上的研究論文Notchand the pre-TCR coordinate thymocyte proliferation by induction of the SCF subinits Fbxl1 and Fbxl12利用BD流式抗體發現調控T細胞分化增殖的關鍵泛素連接酶Fbxl1和Fbxl12。

胸腺中T細胞從分化到成熟的過程受到多個信號分子的調控，并且分化過程中的增殖異常還會引起腫瘤及免疫疾病的發生，因此研究胸腺T細胞的增殖生長對于眾多疾病的治療具有深遠意義。近來研究發現，胸腺T細胞在分化至雙陰性階段的后期開始大量增殖，直至分化至雙陽性階段時終止，然而其調控機制一直不明確。

為了闡明胸腺T細胞分化及增殖的具體分子機制，該論文的研究人員通過培育多種基因敲除的小鼠，并利用BD流式抗體配合流式細胞術等生化手段進行了檢測，從多個角度分析了轉基因小鼠的胸腺T細胞分化增殖情況。研究發現敲除Fbxl1或Fbxl12這兩種泛素連接酶時能夠顯著影響胸腺T細胞的分化及增殖，具體表現為胸腺T細胞從雙陰性階段至雙陽性階段的分化存在明顯的阻斷現象，且外周器官中的T細胞數量顯著降低了。

BD流式抗體配合流式細胞術檢測胸腺T細胞分化程度

此外，將Fbxl1和Fbxl12這兩種泛素連接酶同時敲除后，小鼠的胸腺及淋巴結出現了嚴重的萎縮現象，大量的胸腺T細胞被阻斷于雙陰性階段，無法繼續分化至成熟，充分證明了兩種泛素連接酶之間的協同作用。

BD流式抗體配合流式細胞術證明兩種泛素連接酶之間的協同作用

通過流式細胞術、免疫共沉淀、融合蛋白沉降的技術手段也印證了兩種泛素連接酶與細胞周期調節因子（Cdkn1b）Cdkn1b之間的相互作用，即通過在K165位點形成K48泛素鏈從而降解細胞周期調節因子來調控T細胞的分化增殖。與此同時，作者還進一步闡述了調控的分子信號網絡，即Notch和TCR信號通路在胸腺T細胞分化的雙陰性3b階段通過分別上調Fbxl1與Fbxl12的表達量以泛素化降解Cdkn1b，從而實現對胸腺T細胞分化增殖的精確調控。

通過流式細胞術闡述調控分子的信號網絡

T淋巴細胞依據其表面的TCR可以分為兩大類：αβ T細胞和γδ T細胞。γδ T細胞是一種表型和功能獨特的T淋巴細胞亞群，絕大多數為雙陰性T淋巴細胞。健康成人外周血中γδ T細胞數量占總T淋巴細胞的1-10%，主要分布于黏膜及上皮組織之中，是固有免疫和適應性免疫的橋梁。因此作者又進一步檢測了γδ T細胞在胸腺的分化增殖情況，發現來源于同一祖細胞的αβ T細胞和γδ T細胞都在胸腺里分化成熟，但調控機制并不相同。γδ T細胞通過γδ TCR信號通路進行轉導，引起Fbxl12高表達從而降解細胞周期調節因子Cdkn1b，從而啟動細胞分化及增殖，而對Notch信號不敏感，從而無法調控Fbxl1的表達量。

BD PMG在免疫細胞分型及細胞周期中的應用